Priscilla Nascimento Guasti1; Marcely Karoline da Conceição Ecker2; Marcus André Ferreira Sá1; Bruno Gomes Nogueira1; Julio César Ferraz Jacob3

1. Discente do Curso de Medicina Veterinária; 2. Bolsista de Iniciação Científica PROIC/UFRuralRJ, Discente do Curso de Medicina Veterinária; 3. Professor da UFRRJ – Instituto de Zootecnia – DRAA.

Palavras-chaves: cloreto de cálcio, sêmen, eqüino, Mangalarga Marchador

Introdução

A utilização de garanhões otimizada pelo emprego de tecnologias, derruba barreiras geográficas, elimina ou diminui a propagação de doenças sexualmente transmissíveis, possibilita o uso de animais mortos ou lesados e permite a preservação de material genético por um inesgotável período de tempo. No entanto, devido às dificuldades relacionadas à preservação de sêmen eqüino por intervalos prolongados sem alterações em seus parâmetros espermáticos, novas metodologias envolvendo composição de diluidores têm sido estudadas a fim de expandir as técnicas de conservação. TONIOLLI & COMBARNOUS (1999) estudaram o efeito da adição de cloreto de cálcio (CaCl2) ao sêmen suíno. Estes autores utilizaram diferentes níveis de CaCl2 e observaram que as doses mais fracas desse sal tiveram uma ação positiva sobre a motilidade espermática. Trabalhando com sêmen de carneiro, ASHWORTH et al. (1994) obtiveram um aumento do número de espermatozóides móveis após a adição de 2,0 mM de cálcio no meio de diluição. Em estudo semelhante, LIMA (2006) utilizando níveis de 0; 2,5; 5,0 e 7,5 mM de CaCl2, constatou que as amostras de ejaculados que receberam os maiores níveis de CaCl2 obtiveram diferença significativa sobre a motilidade espermática, porém, em relação ao vigor, viabilidade espermática e ao teste de resistência osmótica os níveis de CaCl2 não influenciaram seus resultados. De acordo com a autora, este sal apresenta uma boa estabilidade e não precipita no meio de diluição, sendo estas as principais causas de sua escolha. O cálcio iônico tem um papel regulador no controle energético da motilidade espermática e

do metabolismo (NISHIMURA, 1993; WHITE, 1993), sendo responsável por modificações bioquímicas importantes para a função normal do espermatozóide. O objetivo deste trabalho foi verificar a eficiência dos meios diluidores com os diferentes níveis de cloreto de cálcio.

Material e Métodos

Foram utilizados 12 ejaculados de quatro garanhões da raça Mangalarga Marchador, com idades variando entre 3 e 15 anos, sendo estes considerados animais de boa fertilidade. Os ejaculados foram coletados pelo método da vagina artificial modelo Hannover equipada com copo coletor contendo um filtro de nylon. As coletas foram realizadas em dias alternados. Os ejaculados foram diluídos na proporção de 2:1 com diluidor Kenney e fracionados em quatro partes iguais. Após o fracionamento, foram acrescidas às amostras os respectivos níveis de cloreto de cálcio 0; 2,5; 5,0 e 7,5 mM. As amostras foram mantidas em banho-maria a 370 C durante 10 minutos e observados os seguintes parâmetros espermáticos: motilidade progressiva, vigor espermático, vivos e mortos e integridade da membrana plasmática espermática (MIES FILHO, 1982; DELL`AQUA, 2000). Todos os parâmetros foram analisados em microscópio óptico com objetivas de 10 e 40x em todas as análises. Procedeu-se a análise de variância (ANOVA) entre a média dos resultados de cada garanhão.

Resultados e Discussão

As amostras dos ejaculados que foram adicionados os níveis de CaCl2 de 7,5 mM obtiveram menores valores de motilidade espermática (P<0,05) que o grupo controle e o grupo com níveis de CaCl2 de 2,5 mM. Porém, quanto ao parâmetro vigor espermático, não houve diferença (P>0,05). A taxa de espermatozóides mortos foi maior (P<0,01) no nível de CaCl2 7,5 mM, quando comparado com as demais concentrações, sugerindo correlação com a motilidade. No choque hiposmótico, a integridade de membrana para o nível de CaCl2 2,5 mM apresentou-se superior (P<0,05). Conforme os resultados encontrados no presente trabalho, em outras espécies como carneiros e hamsters, a alta concentração de cálcio no meio extra-celular tem efeito negativo sobre a motilidade dos espermatozóides (WHITE, 1993). Os resultados obtidos com a concentração de cálcio acima de 2,5 mM não estão de acordo com os de LIMA (2006), que mostraram que este íon, em suínos, tem efeito significativo sobre a motilidade espermática. Pode-se então pensar que o cálcio no meio extra-celular provoque um desequilíbrio nocivo à membrana dos espermatozóides (TONIOLLI & COMBARNOUS, 1999).

Conclusão

A adição do CaCl2 no sêmen eqüino demonstrou não ter efeito benéfico, porém a elevada concentração de CaCl2 influenciou negativamente sobre os parâmetros analisados. Como não houve homogeneidade das amostras sugere-se aprofundar e determinar de maneira mais precisa a concentração ideal de cálcio a ser adicionado ao diluidor.

Referência Bibliográfica

ASHWORTH, P.J.C.; HARRISON, R.A.P.; MULLER, N.G.A. Survival of ram spermatozoa at high dilution: protective effect of simple constituents of culture media as compared with seminal plasma. Reprod. Fertil. Dev., p.173-180, 1994.

DELL`AQUA, Jr. J.A. Efeito da centrifugação, tipos de envase e temperatura de descongelação sobre os parâmetros espermáticos e índice de fertilidade relacionados com o local de deposição e concentração da dose inseminante do sêmen congelado eqüino. Botucatu, SP, 2000. 81 p. Tese (Mestrado em Medicina Veterinária) – Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia – UNESP.

LIMA, F.P. Efeito da adição de cloreto de cálcio sobre a qualidade espermática de sêmen resfriado de suíno. Lavras, MG, 2006. 47 p. Tese (Mestrado em Medicina Veterinária) – Universidade Federal de Lavras.

MIES FILHO, A. Reprodução dos animais domésticos e inseminação artificial, Sulina, Porto Alegre, v.5, p.380, 1982.

NISHIMURA, K. Effects of calcium ions on the malate-aspartame shuttle in slow-cooled boar spermatozoa. Biology Reproduction, USA, v.49, n.3, p.537-543, 1993.

TONIOLLI, R.; COMBARNOUS, Y. Adição de cálcio (CaCl2) ao diluidor do sêmen do reprodutor: efeito sobre a motilidade espermática. Revista Brasileira de Reprodução Animal, Belo Horizonte, v.23, n.1, p.33-40, 1999.

WHITE, I.G. Lipids and calcium uptake of sperm in relation to cold shock and preservation: a review. Reprod. Fertil. Dev, USA, v.5, p.639-658, 1993.